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GIP人胃腸激素多肽檢測(cè) ELISA試劑盒，IBL品牌，科潤(rùn)達(dá)生物代理

檢測(cè)原理

該人胃腸激素多肽試劑盒是使用2種高度特異性抗體的固相夾心ELISA。四甲基聯(lián)苯胺（TMB）用作著色劑（Chromogen）。染色程度與人類總GIP的數(shù)量成比例。

檢測(cè)樣本

人EDTA-血漿

在人胃腸激素多肽活性形式的情況下，GIP也用相同的樣品測(cè)量，收集樣品時(shí)必須加入DPPIV抑制劑，或使用特制的血液收集管以保護(hù)GIP。

細(xì)胞培養(yǎng)上清液

儲(chǔ)存條件

GIP人胃腸激素多肽檢測(cè) ELISA試劑盒在2-8℃保存，有效期見試劑盒外包裝。

實(shí)驗(yàn)步驟

使用前，將所有試劑應(yīng)平衡至室溫，大約30min，充分混勻，確保試劑質(zhì)量無(wú)改變，標(biāo)準(zhǔn)曲線和樣品檢測(cè)必須同時(shí)進(jìn)行。

1) 確定試劑空白孔，并加入100ul EIA緩沖液。

2) 確定樣本空白孔、樣本孔和標(biāo)準(zhǔn)品孔，并將樣本空白（管8），樣本和標(biāo)準(zhǔn)品（管1-7）100ul分別加入相應(yīng)的孔中。

3) 蓋板，37℃孵育60min。

4) 洗板，倒去孔內(nèi)反應(yīng)液，按要求加入預(yù)先準(zhǔn)備好的洗滌液(每孔不少于350ul)，，再棄去廢液。重復(fù)洗板4次。在吸水紙上拍干，去除殘留液滴。

5) 除試劑空白孔外，將其余每孔中加入100ul 準(zhǔn)備好的標(biāo)記抗體。

6) 蓋板，4℃孵育60min。

7) 洗板，倒去孔內(nèi)反應(yīng)液，按要求加入預(yù)先準(zhǔn)備好的洗滌液(每孔不少于350ul)，，再棄去廢液。重復(fù)洗板5次。在吸水紙上拍干，去除殘留液滴。

8) 取需要量的底物液到一次性檢測(cè)管中，每孔加入100ul TMB溶液。為了避免污染，檢測(cè)管中剩余的底物液不得再次放回原底物液瓶中。

9) 黑暗中室溫孵育30min，顏色變藍(lán)。

10) 每孔加入100ul 終止液終止反應(yīng)，通過(guò)點(diǎn)擊板的一面來(lái)混合板內(nèi)溶液，此時(shí)顏色變?yōu)辄S色。

11) 讀取OD值：將板底污物清除，并保證板孔內(nèi)無(wú)氣泡，以空白孔為對(duì)照進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)品和樣本的測(cè)量。測(cè)量在450nm處進(jìn)行，參考波長(zhǎng)600-650nm，測(cè)量應(yīng)在終止液加入后30min內(nèi)進(jìn)行。

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